Chemistry

پراکنده شدن امواج نورانی توسط ذرات (کلوئید) و دیده شدن مسیر نور را اثر تیندال گویند. بنابراین در محلول‏ها دیده نمی‏شود.

مهمترين قسمتهاي يك دستگاه HPLC عبارتست از:

1 -  سيستم انتقال حلال (پمپ)

2 – محل تزريق (Injector)

3 – ستون

4 – آشكار ساز

5 – كامپيوتر براي ارزيابي ديتا ها

حلالها در HPLC :

مهمترين حلالهايي كه در HPLC استفاده ميشوند عبارتند از : متانل – استونيتريل – آب مقطر – بافرها

آب مقطر مورد استفاده بايد آب مقطر 2 بار تقطير باشد و قبل از استفاده حتما با فيلتر هاي آبي 45/0 ميكرون فيلتر شود.

بقيه حلالها بايد كيفيت مناسب از نظر خلوص را داشته باشند يا به عبارت ديگر گريد HPLC‌باشند. بهتر است كه جهت اطمينان اين حلالها هم قبل از استفاده با فيلترهاي آلي 45/0 ميكرون فيلتر شوند.

 يك نكته مهم اينست كه در HPLC حلالهاي ما بايد عاري از گاز هايي مثل اكسيژن باشند كه براي اين كار از گاز هليوم با خلوص بسيار بالا استفاده ميشود.

ستون:

انتخاب نوع ستون بستگي به ماده مورد آزمون دارد و در واقع بر اساس آن انتخاب ميشود.ستونها با مواد مختلفي پر ميشوند. مثلا ستون C18 از سيليكاژل اصلاح شده پر شده است.

آشكارساز(Detector):

اكثرا از آشكارسازهاي UV استفاده ميشود.

ارزيابي ديتاها:

براي ارزيابي ديتاها نياز به يك دستگاه كامپيوتر داريم كه بايد برنامه نرم افزاري مربوط به آن دستگاه HPLC روي كامپيوتر نصب شده باشد.براي ارزيابي ديتاها اغلب از سطح زير پيكها استفاده ميشود نه ارتفاع پيك.

شروع كار با دستگاه:

در ابتدا بايد مسير شسته شود و فرض كنيم كه نميدانيم نفر قبلي از چه حلالهايي استفاده كرده است

حال ميتوانيد ستون مورد نظرتان را وصل كرده با مخلوط 50:50 متانل و آب شستشو دهيد تا جذبي كه دستگاه نشان ميدهد ثابت بماند.سپس با فاز متحركي كه مي خواهيد با آن كار كنيد را تزريق كنيد تا مسيرها و ستون را شستشو دهد تا زمانيكه عدد مربوط به جذب ثابت بماند.

وقتي اين عدد ثابت ماند به دستگاه اعلام ميكنيم كه جذب مربوط به فاز متحرك را صفر در نظر بگيرد.

**

نكات مهم:

ترتيب روشن كردن قسمتهاي مختلف دستگاه: كامپيوتر(اگر تنظيمات پمپ با آن انجام ميشود) – پمپ- تزريق كننده و سپس آشكارساز.

* 

*بعد از روشن كردن پمپ مطمئن شويد كه حلالي كه مسير و ستون را شستشو ميدهد پس از انجام وظيفه خود توسط شلنگ مربوطه از سيستم خارج شده و به درون ظرف دور ريز ميريزد. اگر چنين نبود به احتمال زياد در پمپ هوا وجود دارد كه به كمك يك سرنگ آنرا خالي كنيد.

*هرگز مستقيما فاز متحرك را از بافر به استونيتريل 100% و بالعكس تغيير ندهيد چون باعث رسوب نمك بافر در دستگاه ميشود.